什么是银染：【SADT-024】噴射ガマンの逆ナン指令 野外浣腸悪戯
银染是一种独特而宏大的染色本领，可用于检测和果决凝胶中的卵白质。这是因为银结合在氨基的化学结尾或侧链上，即羧基和巯基。它还是被用于从聚丙烯酰胺凝胶电泳均诀别卵白质。银染是一种高度机灵的按序，对卵白质具有特异性和聘请性。它产生的图像配景更少，质谱干预更少。银染的一般圭臬包括银的固定、致敏作用、银的浸渍和图像的酿成。一些被纠正的银染按序能在一小时内完成，另一些需要24小时才气完成。结尾染色不错默契保抓几周。
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图1：银染效力（图片起首于Polysciences, Inc.）
银染的旨趣：
银染有两种主要按序，互异主要在银浸渗阶段。
碱法：
该按序主若是哄骗铵和氢氧化钠构成的碱性空间中的硝酸银的二胺络合物。
卵白质模式是在稀释的酸性的甲醛溶液中酿成的。
酸法：
该按序接受水中的硝酸银溶液进行凝胶浸渍，并在氨和氢氧化钠的碱性环境下的甲醛溶液中建筑卵白质模式。银染是一种浅易的按序，将结合卵白质分子的肇端位点的银聘请性收复为不溶的金属银。
银染色的各个阶段是：
卵白质的固定和干预身分的去除。
用加快卵白质对银和/或银收复（敏锐和洗涤）的元素进行凝胶处罚。
用纯硝酸银或氨化银浸渍银
凝胶冲洗和获取银金属图像。
格林童话所产生的图像暗影取决于附着在银质上的卵白质的数目。
银染的卵白泄漏深棕色或玄色，这取决于染色银的款式强度。
款式的变化是由于不同大小的银颗粒的散射和衍射。
银染所需的试剂：
1. 3%丙烯酰胺溶液：将2.0 ml 0.8 M Tris-HCl（pH 8.6）、0.75 ml 38.9%（w/v）丙烯酰胺和1.1%（w/v）双丙烯酰胺加入7.25 ml水中庸8 mg过硫酸铵夹杂制备。
2. 20%丙烯酰胺溶液：将2.0 ml 0.8 M Tris-HCl（pH 8.6）、5.0 ml 38.9%丙烯酰胺和1.1%双丙烯酰胺以及8 mg过硫酸铵加入3 ml水中。
3. 用40%酒精、10%醋酸、50%水夹杂配制固定液。
4. 由20%酒精、5%乙酸、75%水、4 mg二硫苏糖醇夹杂配制卵白质处罚溶液。
5. 0.5%重铬酸盐
6. 0.1%硝酸银
7. 用0.02%多聚甲醛、3%碳酸钠制备络合物酿成溶液
8. 1%乙酸
银染门径：
银染的门径比拟多，但这里只盘考两个最主要的门径。频繁需要先跑聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）后，再进行银染。
门径A：SDS-PAGE。这里不再赘述。
门径1B：银染。
1. 加入固定液30分钟，固定凝胶。
2. 用卵白质处罚液处罚凝胶30分钟。
3. 用0.5%的重铬酸盐冲洗凝胶5分钟。
4. 用水清洗凝胶5分钟。
5. 用0.1%的硝酸银均衡凝胶30分钟。
6. 用水清洗凝胶1分钟。
7. 用络合物酿成溶液液，在pH值12下孵育凝胶。
8. 加入1%的乙酸绝交络合物的酿成。
9. 将凝胶固定在玻璃或聚酯板上进行不雅察和/或储存。
门径2B：硝酸银长染色
1. SDS-PAGE处罚后，将凝胶固定在30%酒精和10%乙酸中60分钟。
2. 更换固定液，搁置过夜。
3. 使用四硫代酸盐增敏溶液使凝胶增敏45分钟。
4. 用20%的酒精冲洗凝胶，分两部分（两次），每次洗涤至少10分钟。
5. 用水冲洗凝胶四次，每次冲洗10分钟。
6. 用12 mM的硝酸银浸渍凝胶。
7. 将凝胶浸泡在硝酸银中，放在一个半装满水、碱性显影剂和一个装有绝交液的盒子（每升40克Tris和20毫升醋酸）中。
8. 用去离子水冲洗，并将凝胶从银溶液中取出。
9. 在水浴中浸泡10秒钟，然后升沉到基本的显影剂溶液中。
10. 通过剥离含显影剂凝胶盒来从头溶化千里淀。
11. 达到染色经过后，将凝胶升沉到三住手溶液中30分钟。
12. 用水清洗凝胶，不雅察或储存。
银染的应用：
1. 一般来说，银染不错看成细菌和真菌感染的会诊器具，如假单胞菌、钯密螺旋体、幽门螺杆菌、军团菌、钩端螺旋体、巴尔通体、肺孢子虫、念珠菌、组织原体、隐球菌、隐球菌引起的感染。所有这些生物齐能被银染色上。
2. 银染可用于检测和可视化卵白质。
3. 银染不错用来识别卵白质的结构互异。
4. 银染不错定量样品中的卵白质的数目。
5. 银染也不错用于检测DNA和RNA分子的样原来对基因组进行分析。
6. 银染也用于SDS-PAGE检测细菌脂多糖。
7. 银染也可用于检测肝活检中的真菌脂多糖。
银染的上风和不及：
上风：操作浅易、老本低、效力可靠、敏锐度高、更抓久况且也能用于DNA和RNA的染色
不及：配景高且不默契
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